Técnica:
1. Obtener la muestra de sangre por punción venosa
2. Centrifugar a 2500 rpm por 5 minutos para obtener el suero.
3. Tomar Dos gotas de suero utilizando la pipeta proporcionada en el equipo y colocarlas cuidadosamente en el área de prueba del casete.
Interpretación:
Dos líneas (Con y TnI) POSITIVO
Un línea (Con) Negativo
Una línea (TnI) o ninguna NO VALIDO
Nota: La líne Con, siempre saldrá.
Fundamento:
El objetivo de las pruebas cruzadas de compatibilidad es investigar anticuerpos específicos activos a 37°C en el suero del paciente contra los eritrocitos del donador y viceversa.
La prueba Cruzada se divide en tres partes:
1. Prueba mayor que contiene el suero del paciente y eritrocitos del donador (D)
2. Prueba menor que contiene el suero del donador y los eritrocitos del paciente (R)
3. El auto testigo que contiene el suero y eritrocitos del paciente (R)
Técnica
~Centrifugar el tubo del receptor 5 minutos a 3500 revoluciones por minuto para separar completamente el suero de los eritrocitos del coágulo.
~ Colocar Dos gotas de sangre del tubo en otro tubo y adicionar la solución salina.
~ Realizar tres lavados por un tiempo de 3 minutos.
~ Después de los lavados hacer una solución de eritrocitos al 5% con solución salina (este tubo contiene eritrocitos lavados de la sangre del donador)
~ Colocar en una gradilla tres tubos previamente rotulados
~ Con una pipeta pasteur colocar Dos gotas de suero o plasma del donador y una gota de células o eritrocitos del paciente en el tubo de la prueba menor.
~ Colocar con una pipeta en el tubo del auto testigo Dos gotas de suero del paciente y una gota de eritrocitos al mismo tiempo (paciente)
~ Mezclar perfectamente el contenido de los tubos centrifugar durante 30 segundos a 3400 revoluciones por minuto.
~ Leer y reportar en la hoja de anotaciones (SR) Salina rápida
* Si en alguno de los tubos se observa hemólisis glutina ción debe rectificarse de inmediato el grupo sanguíneo tanto del donador como el receptor.
~ Si las lecturas o negativas continuar con el procedimiento a incubar los tubos en el baño maría a 37°C durante una hora
~ Una vez terminada la incubación centrífuga rápidamente todos los tubos durante 30 segundos a 3400 revoluciones por minuto.
~ Leer y reportar los resultados en la hoja de reporte.
~ Si se observa aglutinación y hemólisis la prueba es incompatible si el resultado es negativo se sigue con la prueba.
~ Lavar los tubos tres veces con solución salina de cantando y secando después de cada centrifugacion.
~ Agregar a cada tubo una gota de suero de Cómo mezclar y centrifugar durante 30 segundos a 3400 revoluciones por minuto.
~ Leer los resultados y anotar en la hoja de reporte.
Los eritrocitos clasificados como D-u poseen el antígeno D pero esta expresado débilmente, por ello no aglutinan directamente con la mayoría de los sueros anti Rh (D), sin embargo es reconocido con la antiglobulina humana (suero de Coombs)
La técnica para realizar esta práctica se hace de la siguiente manera:
1.incubar el tubo con la muestra(el que dio negativo en el Rh en la determinación de D) a 37•c de 15 a 60 minutos
2. Lavar los eritrocitos de la siguiente manera:
3. Agregar 3 gotas de ssf y agitar suavemente para resuspender los eritrocitos, posteriormente llenar los terceras partes del tubo con ssf procurando que quede una suspensión homogénea
4.centrifugar a 3400 r.p.m por tres minutos y decantar
5. Repetir 3 veces el paso anterior, al término del último lavado decantar perfectamente la solución salina
6. Invertir el tubo y secar el borde con una gasa.
7.agregar dos gotas de suero de Coombs y mezclar suavemente
8. Centrifugar a 3400 r.p.m por 15s o a 1000 r.p.m por un minuto
9. Resuspender suavemente el botón de eritrocitos del fondo del tubo y observar microscopicamente la aglutinación y anotar el resultado en número de cruces
Para determinar la presencia o ausencia del antígeno Rh (D) se utilizará el reactivo hemotipificador anti-Rh (D)
Técnica en tubo
1. Rotula los tubos con el número de muestra correspondiente
2. Coloca una gota de suero hemotipificador Anti-D y para el control una gota de albúmina al 22%
3.agrega una gota de suspensión de eritrocitos al 5% de la muestra problema a cada uno de los tubos
4. Centrifugar a 3400 r.p.m por 15 segundos o 1000 por un minuto
5. Observa microscopicamente la aglutinación e informa mediante cruces
La aglutinación deso eritrocitos Anti-D se clasifica como Rh positivos, la ausencia de la aglutinación se clasifica como posible Rh negativo. En este caso se sugiere continuar con la l prueba variante D
Introducción:
El virus de la inmunodeficiencia humana se ha reconocido como el agente etiológico del síndrome de inmunodeficiencia adquirida.
Técnica:
1. Obtener la muestra de sangre por punción venosa
2. Centrifugar a 2500 rpm por 5 minutos para obtener el suero.
3. Tomar Dos gotas de suero utilizando la pipeta proporcionada en el equipo y colocarlas cuidadosamente en el área de prueba del casete.
Interpretación:
Dos líneas (Con y TnI) POSITIVO
Un línea (Con) Negativo
Una línea (TnI) o ninguna NO VALIDO
Nota: La líne Con, siempre saldrá.
La identificación de los anticuerpos naturales del sistema ABO se realiza utilizando antígenos conocidos: eritrocitos A,B y O, que al ponerlos en contacto con el suero problema, se manifiesta por medio de aglutinación
TECNICA EN TUBO:
1. Los tubos se rotulan con el número de la muestra y la letra de los eritrocitos correspondientes, por ejemplo 1A, 1B, 1O.
2.agregar dos gotas del suero del paciente (suero problema) a cada tubo
3.agregar una gota de eritrocitos al 5% a cada tubo según corresponda
4. Se centrifugara a 3400 r.p.m por 15 segundos o a 1000 r.p.m por 60s
5. Observa microscopicamente las aglutinaciones e informa mediante cruces.
Objetivo: se debe de encontrar el "A" este determinará si se tarta de un subgrupo A1 o A2
Los eritrocitos poseen antígeno A pueden ser subdivididos en Al y A2 las células rojas del grupo A que aglutinan con anti Al lectina se consideran del subgrupo aquellas que no aglutinan con anti A1 lectina se clasifican como A2 aproximadamente el 80% de las células son Al y restante 20% se consideran A2
Método en tubo:
1. Preparar una suspensión de glóbulos rojos en solución salina al 5%
2. Colocar una gota de Anti A lectina en un tubo de 10 X 75
3. Con una pipeta pasteur, agregar una gota de la suspensión de glóbulos rojos.
4. Mezclar bien y centrifugar a 2500 r.p.m por un minuto
5. Re suspender los glóbulos rojos cuidadosamente y examinar el tubo en busca de
aglutinación
INTERPRETACIÓN
1.cuando los glóbulos rojos son aglutinados la reacción es positiva he indica la presencia de antígeno A1 y por lo tanto los glóbulos rojos son A1
2.cuando los glóbulos rojos no aglutinan, la reacción es negativa e indica la ausencia de antígeno A1 y los glóbulos rojos son A2
3. Cuando se investiga en una sangre AB, Con antia Al lectina, si aglutina es AlB, si no aglutina es A2B
Introducción:
La sífilis pocas veces se diagnostica mediante la demostración de organismos en una lesión primaria o secundaria. La serología constituye el método de laboratorio más comúnmente utilizado en el diagnóstico de esta enfermedad.
La serología de la sífilis se basa normalmente en dos grupos generales de Procedimientos 1. En las pruebas de antígenos no treponemicos de las cuales el VDRL constituye un ejemplo principal.
2. las pruebas de antígeno treponemico florecente absorbido
Técnica:
1. colocar una gota de suero en una placa de vidrio
2. añada una gota de emulsión del antígeno acaso suero
3. haga la rotación de la placa durante 4 minutos si la rotación se hace a mano se debe realizar sobre una mesa o superficie plana.
Las reacciones se le inmediatamente después de la rotación.
Interpretación
Positivo: Grumos medianos y grandes.
Negativo: No hay grumos
El fundamento de esta práctica es identificar los antígenos de los grupos sanguíneos del sistema ABO se utilizan anticuerpos específicos y su presencia se manifiesta en forma de aglutinación de los eritrocitos
REACTIVOS A USAR:
Suero hemotipificador anti A, anti B, anti AB,solución isotonica de cloruro de sodio (NaC) al 0.9%
Técnica en tubo:
1.rotular los tubos con el número de la muestra y la etiqueta Anti suero correspondiente.
2.coloca con forero correspondiente una gota de suero hemotipificador (Anti A, Anti B y Anti AB) al tubo correspondiente, y dos gotas del suero de la muestra en estudio al tubo marcado AT
3.prepara una suspensión de eritrocitos al 5% lavados o son lavar según sea la situación
4. Mezclar suavemente el reactivo y el suero
5.centrifugara los tubos a 3400 r.p.m por 15 segundos o a 1000 r.p.m por 60s
6. Observa microscopicamente la aglutinación y anota tu resultado
INTERPRETACIÓN DE LAS AGLUTINACIONES OBSERVADAS
Para la interpretación se deberá considerar el grado de aglutinación microscópica de 0 a 4 cruces.Que se relacionan con la intensidad de aglutinación del paquete de eritrocitos y con el color del sobrenadante. Observa el tuvo inmediatamente después de la centrifugacion colocándolo en forma horizontal a la altura de los ojos y frente a una fuente de luz. El tubo se agitada suavemente desplazando la suspensión con el objeto de observar adecuadamente el grado de aglutinación
Fundamento:
La prueba se basa en la inhibición de algunas aglutinaciones inespecíficas a pH bajo se emplea un antígeno corpuscular de 8% de concentración celular en una solución topé a PH 3.65.
Procedimiento:
1. Colocar una gota de suero problema sobre uno de los círculos de la lámina de plástico
2. Colocar una gota de antígeno rosa de bengala cerca de la gota del suero.
3. Mezclar bien el suero y el antígeno utilizando un agitador o mondadientes distinto para cada muestra.
4. Hacer girar la lámina tarjeta durante 4 minutos a razón de 10 a 12 movimientos por minuto esto se puede hacer en forma manual o con rotadores.
5. el resultado de la prueba se le a los 4 minutos sobre un fondo blanco las reacciones positivas presentan grumos de aglutinación que se pueden ser grandes o pequeños.
Interpretación:
Aglutinación: Positivo
No aglutinación: Negativo
Prueba de Coombs Directa:
1. Prepara una suspensión de eritrocitos al 5%.
2. Agrega dos gotas del reactivo
3. Incubar 30 minutos a 37°C, extraer el tubo y observar si existe aglutinación con leves movimientos de inclinación.
Interpretación:
1. Si se manifiesta la aglutinación en el paso 2, indica la presencia de aglutininas anti Rh.
2. Si no hay aglutinación, se afirma la existencia de anticuerpos incompletos y se comprueba siguiendo la técnica.
Prueba Coombs Indirecta:
1. En tubo poner cuatro gotas del suero del paciente y una gota de de suspención de eritrocitos al 5%
2. Se incuba a 37°C por una hora se centrífuga el tubo a 2500 revoluciones por un minuto.
3. Agregar Dos gotas del suero Coombs mezclar perfectamente y poner en baño maría durante cinco minutos.
5. Volver a centrifugar a 2500 revoluciones por minuto y Buscar aglutinación en el fondo del tubo.
En esta práctica se utiliza un brazo echo con una mangera, algodón y medias, se usa una bolsa fraccionadora de sangre, el fundamento es realizar una técnica de flebotomia sin la necesidad de ir a un banco de sangre
1*revisar la bolsa fraccionadora
1.coloquese frente al brazo simulador
2.reconozca la vena sobre la cual hará la punción
3.coloque el torniquete y aseptice la zona
4.tome el sistema de bolsas, antes de retirar el tapón de la bayoneta, realice un medio nudo en el tubo transportador.
5.pinche al inicio de tubo con unas pinzas antes de la punción
6. Introduzca la aguja en la vena
7.en cuanto observe sangre, retire la pinzas y deje correr la Muestra
8.fije la aguja al brazo para evitar movimiento y de esta forma se salga la aguja
9.en cada flebotomia el volumen de sangre extraído deberá de ser de 450 mL, con una variación de un 10%
10.cuando una bolsa se llene, pince nuevamente el tubo transportador
11.apriete fuertemente el nudo del tubo transportador
12. Corte la bolsa
De esta manera es mucho más fácil aprender como se realiza una flebotomia sin la necesidad de ir a un hospital y/o en especial un banco de sangre
El Hematocrito es uno de los métodos con mayor valor estadístico, simple y exacto, este es uno de los parámetros necesarios para determinar los índices eritrociticos: VGM,CMH Y CMHC
El procedimiento consiste en hacer un MICROHEMATOCRITO.
1. Llenar con sangre venosa o capilar las dos terceras partes de un tubo capilar se sellara el extremo que no contiene sangre
2.una vez sellado se centrifugara a 5 000 r.p.m durante 10 min.
3. Al sacar de la centrifuga se observarán 3 capas
a)paquete celular rojo:eritrociticos
b)paquete intermedio: eritrocitos
c)plasma
4.la lectura se hará de la siguiente manera: se coloca el capilar en el surco del lector, gire el dico de manera que el ángulo de 90 grados de las líneas del disco abarquen los extremos de la muestra total de donde se inician las células al menisco del plasma, el resultado se lee expresándolo en porcentaje
LA DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA
En esta parte el procedimiento se hará de la siguiente manera
1.en un tubo de ensaye colocar 5ml de reactivo de drabkin
2.mezclar perfectamente la sangre
3.llenar la pipeta de sahlicalibrada a 0.02ml
4.limpiar la sangre adherida en el exterior de la pipeta y vacía la sangre de la pipeta al líquido diluyente, enjuagando 3 veces la pipeta con el mismo líquido
5.mezclar perfectamente la sangre con el líquido
6.medir la extinción del problema contra la solución reactiva antes ee 3 minutos a 540nm
7. Después de contar las células se utilizará el siguiente cálculo [Hb]=absorbancia X 36.8g de Hb/dl
